故事舞台设定在1600年关原之战14年后。德川家康击败丰臣政权、成为天下霸主后，曾支持丰臣家的武将真田幸村被幽禁于高野山脚下的九度山，与一直暗中以家臣身份追随他的忍者们一同隐姓埋名地生活。 然而，当家康因忌惮年轻的丰臣家当主秀赖起兵反抗，宣布讨伐丰臣家后，局势骤然发生变化。幸村与拥有天才忍术的忍者猿飞佐助相遇，意识到时机已经成熟，于是决定逃离九度山，前往大阪之阵拯救丰臣家。他与一群忠心追随自己的忍者并肩作战，在阴谋、背叛等重重逆境中奋勇反击，同时加深彼此之间的羁绊，最终向家康发起挑战。这是一部以宏大规模描绘一群无名忍者赌上性命展开绝地反击的历史动作故事。

关原之战开始的1年前。出云的巫女伊佐那海被人袭击，在逃亡中遇到伊贺的忍者雾隐才藏，那海只好拜托才藏带她去找信州的真田幸村，就在这时正是真田幸村聚集十位同志的时候……

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电影改编自同名历史小说，战国时代末期，"真田十勇士"在历史上是真田幸村的忠诚家臣团队，其中猿飞佐助与雾隐才藏最为后世所知。

在关原之战开始的一年前，出云神社突然遭受了不明忍者的袭击，巫女伊佐那海也遭到灭门之祸。她在逃亡时被神秘人追杀，遇到了伊贺的忍者雾隐才藏，得其相救，从此对他一见倾心。得到了才藏的帮助的那海拜托才藏，带她去找信州上田城主的真田幸村帮忙，途中遇到甲贺忍者·猿飞佐助，原来猿飞已收归真田幸村麾下。这时正是真田幸村聚集十位同志的时候，集结于真田幸村麾下，天下无敌的军团即将诞生！

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天正十年、织田信长为了消灭甲斐（国名）的武田，大举进兵。这个时候，有颗陨石落到了上信国境内的鸟居山的山腰间，巨大的冲击形成了一个火山口，就有一个叫做猿飞佐助的婴儿被遗弃在了那里。长大成人后的佐助，得到上田的真田家的二儿子信繁（也就是后来的名将军真田幸村）的赏识，成为忍数界的名人，十分的活跃。天下闻名的谋将真田昌信（信繁的父亲）为了解决东西对决的局面，占领上田城，在信繁和其部下佐助的活跃下，只用了2000兵马，就打败了有38000人的德川军…… “真田十勇士”是在战国末期活跃的武将·真田幸村（真田信繁）的10个部下：猿飞佐助、雾隐才藏、三好晴海、三好伊三、海野六郎、祢津甚八、望月六郎、穴山小助、笕十藏、由利镰之助。 当然他们不是历史上实在的人物，是由平民之间脍炙人口的传说和说评书中所产生出传说的英雄。之后，以猿飞佐助、真田十勇士等为题材的小说在织田作之助、林芙美子、柴田炼三郎、五味康佑、檀一雄、富田常雄等日本著名作家的手中诞生。戏曲方面也有福田善之的《真田风云录》，但其中只是将他们定位成普通的角色。其他与十勇士关联不大的还有井上靖的《真田军记》池波正太郎的《真田太平记》等历史小说。 在日本，就算再怎么不了解历史，猿飞佐助和真田十勇士的名字就算称为国民常识也不为过。

天明8年（1788年），京都禁裏（御所）在大火中烧失，尾张德川家作为德川御三家之一，在禁裏重建相关政治工作中迅速接近朝廷。不仅如此，它还掌握了将军家斉所在的一桥德川家的不利弱点，企图逼迫家斉退位以夺取将军之位。松平定信（大宮敏）察觉到尾张藩的不轨动向，为阻止其阴谋、守护家斉的地位，便带着家臣踏上京坂巡视之旅。然而，途中尾张藩派出以百々地源九郎（勝木敏之）为首的忍者集团——伊贺十忍，他们奉密令暗杀定信，早已埋伏在道路旁伺机而动。秋草与从伊贺同心中挑选出的雾之遁兵衛（牧冬吉）等9名忍者一同，一边负责定信的护卫工作，一边以东海道为战场，与伊贺十忍展开战斗。

The ten gladiators are hired to travel to Arbela, a small country on the outskirts of the Roman Empire to learn if Parthia is planning to war with Rome. Upon arriving, the heroes decide to kidnap the beautiful Parthian queen and spirit her to Syria to serve as a hostage.