小蜘蛛彼得和他的好伙伴迈尔斯、格温组成了蜘蛛小队，他们要在城市里发挥自己的力量与反派势力对抗。平日里，他们与梅姨一起愉快相处，而一旦出现意外情况，他们就会立刻变身成为蜘蛛侠，集体出动，制服捣乱的电光人、绿魔、沙人等等。 这几个古灵精怪的小蜘蛛们脑袋里充满了各种各样的智慧，再加上他们各自超强的能力，常常能救整座城市于水火之中。例如，当电光人偷走了城市里的电，让城市变得一片漆黑，小蜘蛛们就会立刻循着踪迹找到电光人，保障城市的用电安全；如果是绿魔污染了城市的河道，或是沙人占据了大家正在度假的沙滩，正义的小蜘蛛和他的小伙伴们都会在人们最需要他们的时候出现，维持城市的正常运转。每次顺利完成了任务，三个小伙伴又会迅速变装回到原来的样子，来到亲爱的梅姨身边。

16 岁的彼得帕克在被蜘蛛咬伤后成为了神奇蜘蛛侠。暑假期间，他与犯罪势力作斗争，以此来面对他心爱的本叔叔去世的悲痛。 抢劫犯和小偷并不是什么大问题，但当彼得遇到超级反派秃鹰时，他的生活变得不可控。 当他试图平衡青少年的平凡生活与打击犯罪的压力时，彼得逐渐读懂了爱情、生活、家庭、友谊，以及如何将自己强大的力量转化为重大的责任。善良的他利用自己的超能力，为民除害，为纽约市民的安全做出了很大的贡献和帮助。

中学生彼特·帕克 （ 托比·马奎尔 饰）自幼父母双亡，与心爱的舅舅、舅妈一起生活在纽约皇后区，过着一个普通学生的生活。就像来自美国许多破碎家庭的孩子一样，尽管彼得人很聪明却很害羞，因此，常常受到一些同学的嘲弄，除了比他更懦弱的哈里·奥斯伯恩 （ 詹姆斯·弗兰科 饰），彼特没有任何朋友，不过彼得一直对邻居家的女孩玛丽 （ 克尔斯滕·邓斯特 饰）情有独钟。但哈里·奥斯本也同他一样爱上了玛丽。在一次学校组织的活动中，彼得和同学们去看有关蜘蛛的科学展览。正在拍照的彼得没有注意一只基因变异的蜘蛛从大棚的吊灯上顺着蛛丝猛然掉落，慌不择路间在彼得的手上咬了一口，彼得的手马上肿了起来。回家之后彼得在发了一夜的高烧后，突然发现自己竟被神奇地赋予了蜘蛛的那种能够感知危险来临的第六感，还拥有了许多非同寻常的能力：他成了一只力量超凡、身手敏捷、可以飞岩走壁、发网状粘液的“蜘蛛人”。像所有传说中的英雄人物一样，彼得为自己设计了一套红色蜘蛛紧身服和面具。不久他出现在电视转播的摔跤比赛场上，用自己神奇的力量打败了强悍的对手。但摔跤比赛的主办人拒绝发给彼得3000美元的奖金，理由是他赢得太快了，彼得因此怀恨在心。没想到天赐良机，彼得正好撞上从那个主办人办公室里逃出来的窃贼，为报复主办人他放过了窃贼。由于彼得的自私，他因此付出了沉重的代价——正是这个窃贼杀害了他亲爱的舅舅。作为蜘蛛侠，彼得给了那个窃贼应有的惩罚，但他深受悔恨的折磨。他恨自己没有早日行侠仗义，并在悔恨中想起了舅舅跟他说过的一句话：“能力越大，那你的责任也就越大”。彼得将这句话铭记在心，他决定献身于与罪恶的斗争之中。从此，在城市的每一个角落，只要有犯罪行为，蜘蛛侠就会从天而降，协助警方把罪犯绳之以法。哈里的父亲诺曼·奥斯本 （ 威廉·达福 饰）原本既是一个有钱有势的生意人又是一个著名的科学家，在一次严重失误的科学实验中，他意外地发现了一个神秘的配方可以提高他的智商，增强他的力量。于是诺曼的野心逐渐显露，他杀害了助手并以邪恶的化身——绿魔出现在世上，而平常则仍是一位正人君子。正是这种迷惑使哈里始终以为他是个好父亲，而彼得也险些遭到他的毒手。绿魔劫持了玛丽做人质，要挟蜘蛛侠，一场不可避免的决战终于来临了。在一座天桥上，搏斗极为惨烈又惊心动魄，彼此的胜负仅在毫厘之间。当蜘蛛侠抢先一步击中绿魔的要害后，彼得发现他竟是哈里的父亲。诺曼一边哀求彼得手下留情，一边却突发冷箭，但这终究未能使他逃脱被惩处的下场 。

中学生彼特·帕克 （ 托比·马奎尔 饰）自幼父母双亡，与心爱的舅舅、舅妈一起生活在纽约皇后区，过着一个普通学生的生活。就像来自美国许多破碎家庭的孩子一样，尽管彼得人很聪明却很害羞，因此，常常受到一些同学的嘲弄，除了比他更懦弱的哈里·奥斯伯恩 （ 詹姆斯·弗兰科 饰），彼特没有任何朋友，不过彼得一直对邻居家的女孩玛丽 （ 克尔斯滕·邓斯特 饰）情有独钟。但哈里·奥斯本也同他一样爱上了玛丽。在一次学校组织的活动中，彼得和同学们去看有关蜘蛛的科学展览。正在拍照的彼得没有注意一只基因变异的蜘蛛从大棚的吊灯上顺着蛛丝猛然掉落，慌不择路间在彼得的手上咬了一口，彼得的手马上肿了起来。回家之后彼得在发了一夜的高烧后，突然发现自己竟被神奇地赋予了蜘蛛的那种能够感知危险来临的第六感，还拥有了许多非同寻常的能力：他成了一只力量超凡、身手敏捷、可以飞岩走壁、发网状粘液的“蜘蛛人”。像所有传说中的英雄人物一样，彼得为自己设计了一套红色蜘蛛紧身服和面具。不久他出现在电视转播的摔跤比赛场上，用自己神奇的力量打败了强悍的对手。但摔跤比赛的主办人拒绝发给彼得3000美元的奖金，理由是他赢得太快了，彼得因此怀恨在心。没想到天赐良机，彼得正好撞上从那个主办人办公室里逃出来的窃贼，为报复主办人他放过了窃贼。由于彼得的自私，他因此付出了沉重的代价——正是这个窃贼杀害了他亲爱的舅舅。作为蜘蛛侠，彼得给了那个窃贼应有的惩罚，但他深受悔恨的折磨。他恨自己没有早日行侠仗义，并在悔恨中想起了舅舅跟他说过的一句话：“能力越大，那你的责任也就越大”。彼得将这句话铭记在心，他决定献身于与罪恶的斗争之中。从此，在城市的每一个角落，只要有犯罪行为，蜘蛛侠就会从天而降，协助警方把罪犯绳之以法。哈里的父亲诺曼·奥斯本 （ 威廉·达福 饰）原本既是一个有钱有势的生意人又是一个著名的科学家，在一次严重失误的科学实验中，他意外地发现了一个神秘的配方可以提高他的智商，增强他的力量。于是诺曼的野心逐渐显露，他杀害了助手并以邪恶的化身——绿魔出现在世上，而平常则仍是一位正人君子。正是这种迷惑使哈里始终以为他是个好父亲，而彼得也险些遭到他的毒手。绿魔劫持了玛丽做人质，要挟蜘蛛侠，一场不可避免的决战终于来临了。在一座天桥上，搏斗极为惨烈又惊心动魄，彼此的胜负仅在毫厘之间。当蜘蛛侠抢先一步击中绿魔的要害后，彼得发现他竟是哈里的父亲。诺曼一边哀求彼得手下留情，一边却突发冷箭，但这终究未能使他逃脱被惩处的下场 。